导语：PD-1缓解率不及三成，冷肿瘤把T细胞锁在膜外；多线失败后，病床旁还能拿出什么新招？当免疫调整天花板日益压低，一条由癌细胞主动伸出的“手刹”被悄然揭开，或让耐药患者重燃免疫解围的星火，也为临床医师提供可成药、可组合的全新免疫钥匙。

图源：CMT

PD-1/PD-L1搪塞率不及三成，肿瘤免疫逃遁另有玄关？

三阴性乳腺癌和胶质母细胞瘤一朝复发，临床医师人里实在有用的“热刀兵”历历：PD-1/PD-L1扼制剂在TNBC客不雅缓解率不及15%，GBM更是低于10%，且获益东谈主群在免疫表型上并无明确“红线”可划。更毒手的是，这类肿瘤微环境大皆短少CD8⁺T细胞浸润，即便外周赐与T细胞输注，瘤内也很快被Treg、MDSC和乏氧代谢物共同构建的“免疫池沼”吞没。传统计谋——化疗归并PD-1再叠加放疗——只可顷刻擢升抗原负荷，却无法科罚TCR信号被抓续“静音”的中枢矛盾，导致二线以后果真无决策可选。

当年五年，学界把共扼制分子清单从CTLA-4、PD-1膨胀到TIM-3、LAG-3、TIGIT，但临床转化依旧“雷声大、雨点小”。根柢原因有二：第一，现存靶点多在T细胞自己，阻断后需依赖既存的好意思满TCR信号链，而“冷肿瘤”正巧短少这一前提；第二，膜名义免疫调控收集高度冗余，单纯追加查抄点抗体常堕入“按下葫芦浮起瓢”的轮回。因此，寻找由肿瘤端主动“钳制”TCR近端信号的全新配体-受体轴，成为摧残低免疫搪塞瓶颈的遑急缺口。

2025年3月，Nature Cancer在线发表的“PILRα on tumor cells interacts with the T cell surface protein CD99 to suppress antitumor immunity”恰是对准这一空缺。作家行使EGFR-CAR-T相易的转录组扰动模子，从肿瘤端挖掘到髓系扼制受体PILRα可径直监禁T细胞共刺激分子CD99，进而锁死ZAP70-NFAT-IL-2级联反应。该机制跳出了“在T细胞上找靶”的惯性想维，为临床提供一条由肿瘤端吊销TCR信号“手刹”的全新烦躁旅途，表面上适用于任何CD99⁺T细胞存在的“冷肿瘤”场景。

高通量膜卵白垂纶锁定PILRα，东谈主源化+同源移植双模子考证

本筹商是一项整合RNA-seq筛选、体外东谈主工抗原提呈细胞（aAPC）功能考证及多模子体内疗效评价的多脉络转化筹商，旨在理解PILRα-CD99轴的免疫扼制机制并考证其成药可行性。作家先对EGFR-CAR-T处理后的U87胶质瘤细胞进行深度转录组测序，筛选出600个上调≥2倍且编码膜卵白的基因；归并TCGA生涯数据，锁定32个“高抒发+预后差”候选分子。随后构建抒发抗-CD3 scFv与DAP10/12-CD3ζ-FCER1G信号适配体的aAPC 293T系统，与NFAT-GFP/NFAT-Lucia双论述Jurkat T细胞共培养，一次性功能读出148个膜卵白对TCR信号的促进或扼制活性，从中挑出PILRα等5个显赫扼制分子。体外本质收受健康供者外周血原代T细胞，赐与板结anti-CD3（1 μg/mL）±重组PILRα-ECD-hIg交融卵白（20 μg/mL），以CFSE稀释、CD25/CD69/CD44流式、IFN-γ/颗粒酶B/IL-2 ELISA为主要相当；体里面分则斥地三种移植模子：①NCG小鼠颅内U87-luc+东谈主PBMC东谈主源化模子；②NCG小鼠皮下MDA-MB-231+东谈主PBMC东谈主源化模子；③C57BL/6小鼠同源Hepa 1-6及MC38模子。烦躁轮番包括PILRα敲除、过抒发、茎区O-糖基化位点突变（T&S→A）以及抗-PILRα单抗C21（10 mg/kg，biw）单药或归并anti-PD-1。主要评价见识为肿瘤体积/荧光强度、小鼠总生涯、CD8+ TIL比例与功能分子抒发；次要见识包括血清细胞因子、器官毒性病理及Fc受体依赖效应。

PILRα茎区糖链扣住CD99，C21单抗一刀割断免疫刹车

PILRα茎区O-糖链缺失即丧失免疫扼制力，图1k–q

将茎区12个Ser/Thr一谈突变为Ala（T&S(M)）后，PILRα-hIg分子量下落8 kDa，PNA凝集素信号缩小90%。功能层面，突变卵白对anti-CD3相易的T细胞增殖扼制率由62%降至3%（图1o），CD25⁺细胞比例由28%回升至56%（图1p），IFN-γ、颗粒酶B、IL-2分泌量收复至对照水平（图1q）。作家指出，O-糖基化提供了“刚性远离”，使IgV结构域得以以最好几何角度钳住CD99，删除糖链卓著于“卸了螺丝的扳手”，丧失力学上风。

图1 PILRα黏卵白茎区对其免疫扼制功能必不能少

注：j–l j免疫陈迹：PNA凝集素检测O-糖——ECD阳性，IgV阴性。k 去糖基化酶处理使PILRα条带下移且扼制功能减半。l 酶处理后CD25⁺扼制率由65%降至30%，P=0.0082。m–qT&S(M)突变体分子量↓，PNA信号↓；增殖、CD25、细胞因子分泌与空载体无互异，九游app下载均P＞0.99→确认O-糖基化位点是功能必需。

CD99是PILRα功能性配体而非旁不雅者，图2c–e、图2i–q

CRISPR敲除CD99（效能87%）后，PILRα-hIg对T细胞增殖的扼制率从58%降至4%（图2c），CD25⁺比例由25%升至54%（图2d），IFN-γ分泌由110 pg/mL升至310 pg/mL（图2e）。违抗，敲除CD8α无此逆转效应。竞争ELISA浮现，抗-PILRα单抗C21以0.43 μg/mL的IC50扫数阻断PILRα-CD99归并（图2k）。作家商量觉得，CD99行为TCR共刺激分子，其胞外段与PILRα归并后“被固定”在脂筏外缘，无法与TCRζ链酿成有用顺式簇集，从而径直“掐灭”信号1。

图2 PILRα归并CD99从而扼制T细胞活性

注：a，b CD99或CD8α敲除效能＞85%。c–e anti-CD3刺激下，CD99⁻/⁻使PILRα扼制失效，增殖、CD25、IFN-γ与对照无互异；CD8α⁻/⁻无此效应。f，g PILRα-CD99 KD=64 μM；ELISA EC₅₀=2.146 μg/mL。h:FLAG-PILRα与Myc-CD99互相作用；T&S(M)突变归并消失。i，j 抗PILRα单抗C21：SPR KD=4.92 nM；ELISA EC₅₀=75.6 ng/mL；不与IgV或T&S(M)归并。k C21阻断PILRα-CD99，IC₅₀=0.43 μg/mL。l C21仅归并WTPILRα-293T，几何平均荧光79.2vs5.5（突变）。m–oC21(50 μg/mL)逆转PILRα扼制，增殖42%→78%，CD25⁺ 14%→48%，IFN-γ、GrzB、IL-2均收复，P＜0.0001。p，q CD99⁻/⁻ T细胞中C21失去逆转才调→确认C21作用依赖CD99。

PILRα过抒发显赫加快肿瘤滋长并压缩CD8⁺TIL，图3b–m

在东谈主源化U87-luc颅内模子，PILRα过抒发组第20天荧光信号比对照高3.8倍（图3c），中位生涯裁减至29天（对照42天）。流式浮现瘤内CD8⁺TIL由5.1%降至1.4%，kaiyun sports四功能阳性（CD25⁺IFN-γ⁺GrzB⁺IL-2⁺）亚群比例由2.3%跌至0.4%（图3f）。皮下MDA-MB-231模子重叠出一致趋势：PILRα-OE组肿瘤体积在第28天达1400 mm³，而敲除组仅510 mm³（图3h–j）。作家强调，PILRα抒发水平与“T细胞抹杀”表型呈线性负相关，提醒该轴是冷肿瘤酿成的“主动阀门”。

图3 PILRα扼制小鼠模子抗肿瘤T细胞免疫

注：a–cU87-luc颅内东谈主源化模子，PILRα-KD荧光信号↓2.1倍，生涯中位42天→55天；PILRα-OE信号↑3.8倍，生涯29天。d，e IHC，PILRα-KD瘤内CD8⁺浸润5.1%→12.4%；PILRα-OE违抗。f流式，PILRα-KD使四功能阳性CD8⁺TIL提高2.8倍，P＜0.0001。g–mMDA-MB-231皮下模子，PILRα-KD肿瘤分量1.0 g→0.4 g；PILRα-OE 1.0 g→1.9 g；突变体无互异。

抗-PILRα单抗C21单药即重塑TME并延伸生涯，图4b–e、4i–k

在东谈主源化MDA-MB-231模子，C21 10 mg/kg biw决策使肿瘤在第28天体积缩小55%（图4b），分量由1.0 g降至0.4 g（图4d），中位生涯由38天延伸至58天（图4e）。颅内U87-luc模子中，C21诽谤荧光信号2.1倍（图4j），生涯期由32天延至50天。IHC量化浮现，C21组CD8⁺浸润密度提高3.2倍，四功能阳性TIL比例升至6.7%（图4g、m）。作家觉得，C21通过“开释CD99顺式簇集”遽然收复TCR信号1，卓著于在肿瘤里面“赶快重启”CD8⁺T细胞，无需罕见疫苗或细胞输注。

图4 抗单抗扼制东谈主源化异种移植模子肿瘤滋长

注：a–gMDA-MB-231模子：C21 10 mg/kg biw，肿瘤体积↓55%，分量0.4 g，生涯中位58天（对照38天）；CD8⁺及四功能TIL均↑3倍；IgV归并抗体C126无效。h–m U87-luc颅内模子：C21使荧光信号↓2.1倍，生涯50天vs32天；瘤内CD8⁺浸润及功能分子同步升高，无器官毒性。

C21与PD-1抗体协同把“冷”GBM变“热”，图5b–d

归并组在U87-luc模子第20天荧光信号仅为单药PD-1组的32%（图5c），中位生涯进一步由单药42天延伸至＞60天（图5d）。IHC浮现，归并组CD8⁺TIL密度达8.4%，四功能阳性比例升至10.1%，显赫高于任一单药（图5f）。作家商量指出，PILRα阻断提供“信号1燃料”，PD-1抗体吊销“信号2刹车”，二者序贯使用可绕过T细胞耗竭的“死锁”景色，为PD-1耐药GBM提供“二次反映窗口”。

图5 抗PILRα单抗增强抗PD-1免疫调整的抗肿瘤效果

注：a 本质决策技艺轴：NCG小鼠颅内接种U87-luc（3×10⁵，第-7天）→第0天腹腔输注东谈主PBMC（1×10⁷）→第1天起腹腔赐与C21、抗PD-1或归并，10 mg/kg，每周两次，直至相当。b–d调整效应：b 肿瘤滋长弧线（生物发光总数）：归并组第20天信号较单药再降68%，双身分ANOVAP＜0.0001。c 代表性活体图像：归并组颅底荧光果真消失。d 生涯弧线：中位生涯单药PD-1 42天、C21 45天，归并组＞60天（log-rankP=0.0003）。e，f 免疫组化量化：归并组瘤内CD8⁺浸润密度（e）及CD25⁺、IFN-γ⁺、颗粒酶B⁺、IL-2⁺比例（f）均显赫高于任一单药，P＜0.01；器官H&E未见毒性。

PILRA高抒发是零丁不良预后因子，图6a–c

TCGA 10癌种分析浮现，PILRA在TNBC、GBM、ESCA等肿瘤抒发较通常组织高2.5–6倍（图6a）。Kaplan-Meier拆分高/低抒发组，TNBC五年厌世风险比HR=2.24（95%CI：1.15–4.38，P=0.018），GBM中HR=1.55（1.15–2.09，P=0.0036）。TIMER数据库进一步揭示PILRA抒发与CD8⁺及CD4⁺T细胞浸润呈负相关，ρ值-0.22至-0.33（图6c）。作家论断：PILRA可行为“免疫抹杀”数字病理标记，高抒发患者应优先纳入PILRα阻断剂测验。

山脚下王大叔家的药窖，前儿个丢了整筐千年灵芝，昨儿个李婶晒的天麻也没了影。

图6 PILRα在多种癌种高抒发并预示不良预后

注：a UALCAN数据库，PILRAmRNA（TPM）在TNBC、CHOL、ESCA、GBM、HNSC、KIRC、KIRP、SARC、THCA、STAD肿瘤组织较通常组织升高2.5–6倍，WilcoxonP＜0.001。b Kaplan–Meier生涯拆分（高/低抒发中位数切点），TNBCHR=2.24（1.15–4.38），P=0.018 ESCAHR=2.17（0.99–4.74），P=0.047 GBMHR=1.55（1.15–2.09），P=0.0036 KIRCHR=1.47（1.04–2.10），P=0.030 STADHR=1.65（1.22–1.98），P=0.036 c TIMER相关性，PILRA抒发与CD8⁺及CD4⁺T细胞浸润呈负相关（Spearman ρ –0.22至–0.33，FDR＜0.05）。

回来

本文以“CAR-T相易+膜卵白功能垂纶”计谋，把PILRα从免疫扼制暗网里拎到聚光灯下：其茎区O-糖链像“分子手铐”同样铐住T细胞CD99，割断ZAP70-NFAT-IL-2信号，导致CD8+ TIL失活。靶向茎区的单抗C21能在东谈主源化及同源模子中吊销刹车，与PD-1抗体协同把“冷瘤”变“热瘤”，且未现器官毒性。筹商同期给出可量化的追随见识——PILRA抒发水平与T细胞浸润负相关、与厌世率正相关——为后续临床测验提供患者富集逻辑。简言之，PILRα-CD99是继PD-1/PD-L1之后，兼具机制光显度、成药可行性和组合后劲的“第二查抄点”，值得加快推向转化。

参考文件

Xia L， Liu JY， Yu C， et al. PILRα on tumor cells interacts with the T cell surface protein CD99 to suppress antitumor immunity. [J/OL]Nat Cancer. 2025;6(7):1184-1201. doi:10.1038/s43018-025-00958-7

“医学论坛网”发布医学范围筹商效能妥协读开云体育官方网站，供专科东谈主员科研参考，不行为诊疗圭臬，使用需把柄具体情况评估。